Comparan diferentes métodos para aislar el ADN de los hongos

La mucormicosis infecta con frecuencia los senos nasales, el cerebro o los pulmones. Si bien la infección de la cavidad oral o el cerebro son las formas más comunes de mucormicosis, el hongo también puede infectar otras áreas del cuerpo, como el tracto gastrointestinal, la piel y otros sistemas orgánicos. La enfermedad se caracteriza a menudo por hifas que crecen en y alrededor de los vasos sanguíneos.

Los científicos médicos de la Facultad de Medicina de la Universidad de Turín (Turín, Italia), compararon los métodos de aislamiento de ADN en los mohos del género Mucorales con especial atención a la cantidad y pureza del ADN obtenido. Se utilizaron un total de seis cepas clínicas de Mucorales y estas incluyeron tres de Mucor spp. y tres de Rhizopus spp. Los hongos filamentosos se identificaron según procedimientos morfológicos macroscópicos y microscópicos y se mantuvieron en agar papa dextrosa. Para la extracción de ADN se compararon cinco métodos, denominados A, B, C, D y protocolo E. La amplificación y detección de amplicones utilizando una plantilla de ADN extraída se realizó con un sistema de PCR en tiempo real Applied Biosystems 7500 (Life Technologies, Carlsbad, CA, EUA).

Los científicos informaron que el método A basado en hervir mohos obtuvo una mayor cantidad de ADN fúngico, pero no pudo extraer ADN amplificable de los Mucorales. El uso de microondas y la congelación, peculiaridad de los métodos B y C respectivamente, lograron malos resultados tanto en términos de concentración de ADN como de amplificación. Por otro lado, el método E basado en la adición de un tampón de acetato de potasio en la etapa de lisis, obtuvo un nivel decente de cantidad de ADN fúngico con mayor ADN amplificable de los Mucorales.

Los autores concluyeron que, en general, el método E era el método más eficiente en la extracción de ADN de cultivos de hongos en comparación con los otros métodos, considerando el tiempo, el costo, la experticia técnica y la instrumentación. El uso de este ensayo permitirá a los laboratorios médicos obtener ADN de hongos rápidamente para uso en ensayos moleculares. El estudio fue publicado el 17 de abril de 2021 en la revista Practical Laboratory Medicine.

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Facultad de Medicina de la Universidad de Turín
Life Technologies