Sondas electrónicas detectan enteropatógenos en heces

Se desarrolló un análisis de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) múltiplex para identificar cuatro enteropatógenos en muestras de heces.

La Cyclospora, Cystoisospora, y la Microsporidia son enteropatógenos eucarióticos que son difíciles de detectar en muestras de heces porque requieren microscopía y coloraciones especiales.

Unos científicos que colaboraban con la Universidad de Virginia (Charlottesville, VA, EUA) desarrollaron un PCR múltiplex con cuatro conjuntos de cebadores para amplificar dos parásitos protozoarios, Cyclospora cayetanensis y Cystoisospora belli y dos parásitos microsporidias, Enterocytozoon bieneusi, y Encephalitozoon intestinalis. Los amplicones fueron detectados mediante sondas específicas acopladas a perlas Luminex. La sensibilidad del análisis fue evaluado usando esporas de E. intestinalis y revelaron la detección de 101 esporas colocadas en las heces. No se observó reactividad cruzada con las muestras que contenían una variedad de otros protozoarios patógenos, helmintos, bacterias o virus.

El análisis fue evaluado en 236 muestras de heces diarreicas de Tailandia, Tanzania, Indonesia y Holanda que fueron analizadas previamente por microscopía. La detección de los amplicones fue realizado en el BioPlex 200 (Bio-Rad; Hércules, CA, EUA) o el Luminex 100 (Luminex Corporation; Austin, TX, EUA). El análisis múltiplex dio una sensibilidad de 87% a 100% y una especificidad de 88% a 100%. Las muestras negativas por microscopía y positivas por PCR tenían valores más bajas de Luminex, sugiriendo que eran positivos verdaderas, pero con una carga más baja de infecciones. El límite de detección fue de 102 copias de plásmidos para Cystoisospora y Enterocytozoon bieneusi y 103 copias para Cyclospora.

Los autores concluyeron que el análisis es robusto, habiendo realizado exitosamente las pruebas de campo en diversas locaciones in situ, en diversos sitios incluyendo Tailandia, Tanzania, Virginia y Holanda. El análisis molecular fue validado en un gran número de muestras para enteropatógenos eucarióticos importantes y puede ser usada en aislamiento o en el contexto de algoritmos de detección adicionales de enteropatógenos. El estudio fue publicado en octubre 6, 2011, en la revista Diagnostic Microbiology and Infectious Disease.

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University of Virginia

Bio-Rad

Luminex Corporation