Desarrollan prueba de proliferación viral para el VIH latente

Las muestras fueron enriquecidas, en linfocitos T CD4+, por agotamiento negativo. Para cada paciente, se realizaron análisis tanto de proliferación viral estándar como de proliferación viral MOLT-4/CCR5 utilizando linfocitos T CD4+ en reposo, recién purificados, obtenidos de una única muestra de sangre. Las muestras se enriquecieron aún más en linfocitos T CD4+ en reposo mediante el agotamiento negativo de las células utilizando microesferas específicas (Miltenyi Biotec, Auburn, CA, EUA).

El ADN complementario (ADNc) fue sintetizado a partir del ARN aislado del VIH-1 utilizando el Sistema para síntesis SuperScript III First-Strand (Invitrogen, Grand Island, NY, EUA) con cebadores oligo-dT. El análisis emplea para la detección de virus, una novedosa reacción en cadena de polimerasa con transcripción inversa cuantitativa (RT-PCR), específica para el ARN del VIH-1 poliadenilado, logrando así un método más sensible y más rentable para detectar la replicación del VIH-1 que los métodos comerciales más costosos para detección mediante análisis ELISA.

En promedio, la proliferación viral, desde un depósito latente, fue detectable en condiciones semejantes a las del análisis de proliferación viral MOLT-4/CCR5, con el análisis de RT-PCR específico para VIH-1, después de seis días, frente a 10 días del ELISA para el antígeno p24 del VIH-1. No hubo diferencia significativa entre la frecuencia de la infección latente de células T CD4+ en reposo, cuando se midió al séptimo día utilizando la RT-PCR específica para el VIH-1 y en el día 14 con el ELISA para el antígeno p24 del VIH-1. La utilización de una medición de la proliferación del VIH-1 mediante RT-PCR no sólo permite una detección más sensible de la replicación viral, sino que también permitirá un mayor rendimiento en la medición de la replicación del VIH-1.

Los autores llegaron a la conclusión de que el análisis MOLT-4/CCR5, con la utilización del análisis de proliferación viral es el análisis más rápido y escalable disponible para medir el tamaño del depósito latente de VIH-1. Por lo tanto, creen que este análisis será una herramienta indispensable para evaluar el éxito de las estrategias de tratamiento para reducir o erradicar el reservorio latente del VIH-1. El estudio fue publicado el 30 de mayo de 2013 en la revista Public Library of Science Pathogens.

Enlaces relacionados:

Johns Hopkins University School of Medicine

MiltenyiBiotec

Invitrogen