Detectan la ERM en la LMA mediante secuenciación profunda de las células CD34+

Para los pacientes con neoplasias malignas hematológicas como LMA o síndrome mielodisplásico (SMD) de alto riesgo, el trasplante alogénico de células madre hematopoyéticas (alo-HSCT) sigue siendo, a menudo, la única opción de tratamiento curativo. Sin embargo, la recaída después del alo-HSCT ocurre en 30 % a 70 % de los pacientes con LMA y es la principal causa de fracaso del tratamiento, con un pronóstico sombrío y una supervivencia a 2 años de menos del 20 %.

Científicos médicos del Hospital Universitario Carl Gustav Carus (Dresden, Alemania), evaluaron la viabilidad de un método novedoso para la detección de ERM en sangre periférica (SP), que combina preenriquecimiento inmunomagnético y clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS) para el aislamiento de células CD34+ con secuenciación dirigida de próxima generación (NGS) con reducción de errores. Para la validación clínica, analizaron retrospectivamente 429 muestras de SP y 55 muestras de médula ósea (MO) de 40 pacientes con LMA o SMD de alto riesgo, con/sin recaída molecular basada en el quimerismo del donante (QD) CD34+, en remisión completa después del trasplante alogénico de células madre.

Los científicos aseguraron un enriquecimiento constante de las poblaciones de células CD34+/CD117+ a una alta pureza (es decir, >90 %). Las células CD34+/CD117+ se enriquecieron usando una combinación de separación celular magnética (MACS) y FACS para todas las muestras. Las células mononucleares (CMN) se extrajeron mediante centrifugación en gradiente de densidad y las células CD34+/CD117+ se aislaron de las CMN mediante MACS a través de selección positiva con el Kit Microbead CD34+ o CD117+ (Miltenyi Biotec, Bergisch-Gladbach, Alemania). La clasificación de las células CD34+/CD117+ se realizó luego en un clasificador de células BD FACS Aria II (BD Biosciences, San José, CA, EUA), con el objetivo de obtener de 5.000 a 10.000 células CD34+/CD117+ y una pureza de >90 %. La secuenciación del ADN genómico de células CD34+/CD117+ clasificadas y material sin clasificar se realizó de acuerdo con un protocolo optimizado para la detección, basada en NGS, con reducción de errores, de variantes de un solo nucleótido de bajo nivel.

Los investigadores informaron que el enriquecimiento de células CD34+ para NGS aumentó la detección de alelos mutantes en SP ∼1000 veces (mediana de frecuencia alélica variante, 1,27 % frente a 0,0046 % en SP sin clasificar). Aunque se observó una fuerte correlación para el análisis paralelo de células CD34+ en SP con NGS y QD, la combinación de FACS y NGS mejoró la sensibilidad para la detección de ERM en experimentos de dilución ∼10 veces a niveles de 10−6. En ambos ensayos, la detección de ERM fue superior usando SP versus MO para el enriquecimiento de CD34+. Es importante destacar que la secuenciación de próxima generación (NGS) en células CD34+ de SP permitió la predicción de recaída molecular con alta sensibilidad (100 %) y especificidad (91 %), y significativamente antes (mediana, 48 días; rango, 0-281), que por CD34+ QD o NGS de SP sin clasificar, proporcionando tiempo adicional para la intervención terapéutica. Además, la secuenciación del panel en células CD34+ permitió la evaluación temprana de trayectorias clonales en remisión hematológica completa.

Los autores propusieron un método novedoso, robusto y de fácil acceso para la detección ultrasensible de ERM en SP que es aplicable a la mayoría de los pacientes con LMA. Los resultados iniciales demostraron la viabilidad de la secuenciación profunda dirigida de células CD34+ para la predicción temprana de recaídas en entornos clínicos, con sensibilidad y especificidad superiores, en comparación con la evaluación de ERM basada en quimerismo o el uso de SP sin clasificar para NGS. El estudio se publicó el 2 de junio de 2022 en la revista Blood Advances.

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Hospital Universitario Carl Gustav Carus
Miltenyi Biotec
BD Biosciences